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飼料霉菌毒素檢測(cè)技術(shù)
霉菌毒素是一種有毒的次級(jí)代謝產(chǎn)物，主要由曲霉菌屬、青霉菌屬和鐮刀菌屬等真菌在生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生。霉菌毒素?zé)o色無(wú)味，在作物生產(chǎn)和農(nóng)產(chǎn)品儲(chǔ)存過(guò)程中都會(huì)產(chǎn)生，對(duì)動(dòng)物和人體產(chǎn)生巨大的危害。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，大約有300多種真菌代謝產(chǎn)物有毒害作用，對(duì)畜牧業(yè)形成嚴(yán)重威脅，如何快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)毒素含量對(duì)指導(dǎo)飼料進(jìn)行霉菌毒素的防控具有重要意義，本文簡(jiǎn)述了幾種霉菌毒素的檢測(cè)技術(shù)，為霉菌毒素的防控提供參考。
1. 薄層色譜法（Thin Layer Chromatography，TLC）
薄層色譜法是以涂布于支持板上的支持物作為固定相，以合適的溶劑為流動(dòng)相，對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定和定量的一種層析分離技術(shù)。是建立最早的一種霉菌毒素檢測(cè)方法，具有成本低、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，而且對(duì)儀器設(shè)備和檢驗(yàn)人員的要求不高。TLC根據(jù)樣品理化性質(zhì)的不同，選擇適宜的提取劑，用于霉菌毒素的提取，產(chǎn)物在薄層板上層析分離和展開(kāi)。我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)依然采用此法檢測(cè)飼料和飼用谷物原料中赭曲霉毒素的含量（GB/T 19539-2004）和食品中黃曲霉毒素的含量（GB 5009.22-2016）等。
2. 液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）
HPLC法是當(dāng)前檢測(cè)霉菌毒素最常見(jiàn)的的方法，它以液體為流動(dòng)相，流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后進(jìn)行檢測(cè)。HPLC法有分析速度快、靈敏度高、檢測(cè)限低、易于規(guī)范化操作，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，具有廣泛的適用性，HPLC法已成為實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備比較完善的實(shí)驗(yàn)室常用的分析方法。目前飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中霉菌毒素的檢測(cè)均采用液相色譜法（GB 13078-2017）。
3. 氣相色譜法（Gas Chromatography，GC）
GC法具有與HPLC一樣的優(yōu)勢(shì)，如分離速度快、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但氣相色譜只適用于揮發(fā)性較大同時(shí)熱穩(wěn)定性較高的物質(zhì)的分離檢測(cè)，所以現(xiàn)主要用于鐮刀霉菌毒素和展青霉素等的檢測(cè)。
4. 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）
ELISA法是利用免疫學(xué)原理，將已知抗原吸附在酶標(biāo)板上，加入酶標(biāo)抗體和樣品提取液均勻混合，充分反應(yīng)后洗去多余抗體，加入底物，產(chǎn)生 顯色反應(yīng)，最后加入終止液終止，用酶標(biāo)儀測(cè)定 酶底物的降解量，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算試樣中的抗原含量。ELISA由于操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快， 成本低，使用安全適用于大批量樣品的快速檢測(cè)。但由于抗體的制備較困難，限制了該檢測(cè)方法的應(yīng)用。目前飼料中黃曲霉的檢測(cè)有此方法（GB/T 17480-2008），部分地方標(biāo)準(zhǔn)也有此方法。
5. 免疫層析法(Immu-nochromatography as say，ICA）
免疫層析法（ICA）是以免疫學(xué)為基礎(chǔ)發(fā)展起 來(lái)的一種檢測(cè)方法，它具有檢測(cè)面廣、操作方便、 快捷迅速、特異性強(qiáng)、靈敏準(zhǔn)確、攜帶方便、安全環(huán)保、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)，特別適于大批量樣本的 快速檢測(cè)和基層使用，具有廣闊的應(yīng)用前景。目前，膠體金免疫層析(GICA)就是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物,應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)中的一種新型免 疫標(biāo)記技術(shù)，目前膠體金技術(shù)廣泛用于霉菌的篩查，如飼料黃曲霉毒素測(cè)定（NY/T 2550-2014），但在實(shí)際應(yīng)用中也出現(xiàn)假陽(yáng)性、假陰性、檢測(cè)靈敏度不高、檢測(cè)范圍擴(kuò)大等現(xiàn)象。
6. 其他檢測(cè)技術(shù)
隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，PCR技術(shù)也應(yīng)用到霉菌毒素分析和檢測(cè)中。該方法具有高效、快捷且 成本低等優(yōu)點(diǎn)；另外最近幾年噬菌體展示技術(shù) （PDT）也應(yīng)用到飼料安全快速檢測(cè)體系中，利用PDT技術(shù)先后得到霉菌毒素的模擬表位肽。利用模擬表位肽替代試紙條顯色區(qū)中相應(yīng)的毒素-載體蛋白，不但可以增加檢測(cè)人員的操作的安全性，也減少了霉菌毒素對(duì)環(huán)境的污染，而且該方法安全、快速，降低了檢測(cè)成本。
在霉菌毒素危害的防控中快速、精確、低成本的檢測(cè)方法是當(dāng)今需解決的熱點(diǎn)問(wèn)題?，F(xiàn)有的檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，特別是免疫學(xué)、分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，霉菌毒素檢測(cè)技術(shù)必將更加快速準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單，為加強(qiáng)飼料安全的控制，保證國(guó)人身體健康提供有力保障。
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